該實(shí)驗(yàn)在愛達(dá)荷大學(xué)動(dòng)物、獸醫(yī)和食品科學(xué)系的生殖生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)室的溫度約為22°C。

　　使用容量為30L的液氮儲(chǔ)罐(Union Carbide Linde，LR-30型，美國)。在實(shí)驗(yàn)期間，該罐中沒有儲(chǔ)存精液。罐頸直徑為7cm，頸管長度為12cm，與牧民授精員和專業(yè)人工智能技術(shù)人員目前在奶牛場使用的罐相似。在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，向罐中填充18L液氮(相當(dāng)于22cm)。使用配備有能夠進(jìn)行6秒響應(yīng)時(shí)間的空氣(氣體)探頭的手持式熱電偶溫度計(jì)(TM602;Palmer Wahl Instrumentation Group，Asheville，NC，USA)在三個(gè)位置采集溫度測量值：1)頸部部下方2 cm(霜線上方)，2)頸部部以下7 cm(霜線上和建議的精液吸管移除位置下方)，3)液氮液位上方2 cm(圖1)。

　　通過用不銹鋼勺手動(dòng)去除液氮，罐中的液氮液位從22厘米逐漸降低到7厘米(液氮的體積分別從18升逐漸降低到6升)。如前所述，在每個(gè)位置測量溫度四次，罐中有22、20、19、18、16、12、10和7cm的液氮。每次溫度測量之間的間隔時(shí)間至少為2小時(shí)，以便有足夠的沖洗期，避免潛在的遺留影響。第一輪實(shí)驗(yàn)完成后，再次向同一罐中注入液氮，并在相同的液氮水平和重復(fù)次數(shù)下重復(fù)第二次實(shí)驗(yàn)。

　　使用SAS中的通用線性混合模型程序GLIMMIX分析了液氮液位、位置和雙向相互作用對儲(chǔ)罐溫度的影響數(shù)據(jù)[8]。該模型包括位置、體積和按位置劃分的體積的影響。計(jì)算了所有儲(chǔ)罐位置的溫度變化和小二乘平均溫度的參數(shù)估計(jì)值。顯著性在P<0.05時(shí)較好。

精液儲(chǔ)罐中的溫度對于維持儲(chǔ)罐內(nèi)儲(chǔ)存的精液的存活率至關(guān)重要。測量溫度的三個(gè)位置的溫度變化不一致。根據(jù)估計(jì)的方差，位置2(頸部部以下7厘米，霜線以下)表現(xiàn)出大的變異性(表1)。位置和位置體積對儲(chǔ)罐溫度有影響(P<0.01)。

　　與頸部部以下7cm(霜線以下)相比，頸部部以下2cm的平均水箱溫度更高(P<0.01)(6.4±0.1°C vs-38.3±0.4°C)(表1)。我們關(guān)于位置2溫度(霜線以下)的數(shù)據(jù)非常接近Kaproth報(bào)告的上限(-40°C)[4]。隨著氮水平的降低，溫度保持在0°C以上，在頸部部以下2厘米處(位置1)沒有變化。相比之下，在位置2，隨著液氮體積的減少，頸部部以下7厘米處的溫度升高(從-41.1±1°C升高到-36.7±1°C;P<0.05)(圖2)。這些結(jié)果與之前的報(bào)告[4]一致，即頸部區(qū)域溫度升高與儲(chǔ)罐液氮液位較低有關(guān)。盡管位置3(液氮水平以上2厘米)的平均溫度為-186.3±0.1(表1)，但隨著液氮體積的減少，溫度升高(從-187±0.3°C升高到-185±0.3°C;P<0.05)。